鲨鱼软骨低分子蛋白抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的实验研究

■噙窗　２结果　ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］．ＥｕｒＪＨａｅｍａｔｏｌ，２００５，７４（１）：４ｏ一４６　２１例患者中除１例因沙利度胺引起严重皮疹而拒绝再治　５张之南．血液病诊断及疗效标准【Ｍ】．第２版．北京科学技术出版社．　１９９８，３７３－３７６　疗外，其余２０例均接受Ｔ—ＶＡＤ方案化疗２￣４个疗程，其中ＣＲ　７例（３５％），ＰＲ　８例（４０％），总有效率（ＣＲ＋ＰＲ）为７５％，２０例患　者皆有随访，中位随访时间为２８个月（２个月～５６个月），中位　生存时间为５０个月。截止随访Ｅｔ期，获得ＣＲ的７例患者均存　６　Ｂｌａｄｅ　Ｊ，Ｓａｍｓｏｎ　Ｄ，Ｒｅｅｃｅ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｃｒｉｔｅｒｉａ　ｆｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｒｅ—　ｓｐｏｎｓｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｙｅｌｏｍａ　ｔｒｅａｔｄ　ｂｙ　ｅｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ａｎｄ　ｈａｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｔｒａｎｓｐｌｎｔａａｔｉｏｎ．Ｍｙｅｌｏｍａ　活，其余未获得ＣＲ的１３例患者，３年生存率为５６．６％。２１例均　未出现因不良反应导致的相关死亡。１５例（７５％）患者沙利度胺　用量至４００　ｍｇ／Ｌ，其余用量为２００～３００　ｍ　，且维持治疗。最常　见的不良反应为指端麻木感（３０％），便秘（２０％），嗜睡（２Ｏ％），　水肿（１５％），未出现１例深静脉血栓（ＤＶＴ）。　３讨论　Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＥＢＭＴ【Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｇｒｏｕｐ　ｆｏｒ　Ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　Ｍａｒｒｏｗ　Ｔｒａｎｓｐｌｎｔａ．ＢｒＪＨａｅｍａｔｏｌ，１９９８，１０２（５）：１１１５～１１２３　７　Ｋａｕｓｈａｌ　Ｖ，Ｋａｎｓｈａｌ　Ｇ　Ｐ，Ｍｌｅｋａｖｅｒｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｅｎ—　ｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｍ　ｒｄｏｓｏｒｕｂｉｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｊｕｒｙ　ｂｕｔ　ｌａｔｅｒｓ　ｃｅｌｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏ－　ｇｙ［Ｊ１．Ｈｅｍａｔｏｌ　Ｊ，２００３，４（Ｓｕｐｐｌ　１）：￥２４６　（收稿日期：２００８～０８—０４）　目前，沙利度胺作为抗血管新生药物，用于治疗ＭＭ取得　了一定疗效，不少研究已经证实，沙利度胺治疗ＭＭ，主要与抑　制骨髓微血管的增生、直接作用于瘤细胞和基质细胞、ＤＮＡ的　损伤、抑制瘤细胞与骨髓基质的黏附、抑制刺激癌细胞的各种　鲨鱼软骨低分子蛋白抑制荷瘤　小鼠肿瘤生长的实验研究　尚俊英　董红宇　李雪峰　张　颖　（１北京市石景山医院，北京１０００４３）　（２北京市丰台区长辛店医院，北京１０００７２）　细胞因子的分泌和功能并调节机体免疫等因素有关。ＶＡＤ方　案能有效地减低肿瘤负荷，对骨髓干细胞毒性较小。国外的多　次研究　证实，沙利度胺＋联合化疗的总有效率较单独化疗有　所提高（Ｔ－ｖＡＤ　７４％），我们以Ｔ＿ｖＡＤ方案治疗ＭＭ的总有效　率为７５％高于传统化疗，与国外报道　的有效率相似。　ＭＭ患者本身有多种常见的引起静脉血栓的因素，如活动　【摘要】目的　观察ＳＣ低分子蛋白对荷瘤小鼠肿瘤生　长的影响。方法　选Ｃ５７ＢＬ／６小鼠４０只，随机分为４组，建　受限、脱水、血浆黏滞度增高、间断发生感染等。有资料目表明沙　利度胺联合地塞米松治疗初治的ＭＭ患者，ＤＶＴ发生率较高。　有体外实验证明，沙利度胺能通过刺激被多柔比星损伤的内皮　组织上的凝血酶受体而促进凝血　。我院收治的２０例患者接受　立荷Ｌｅｗｉｓ肺癌肿瘤小鼠模型，连续给药１０　ｄ后，计算各组肿　瘤抑制率。结果　鲨鱼软骨低分子蛋白能抑制荷Ｌｅｗｉｓ肺癌肿　瘤小鼠肿瘤生长，鲨鱼软骨低分子蛋白组与生理盐水组相比差　的Ｔ—ＶＡＤ方案化疗，沙利度胺最大用量至４００　ｍｓ／ｄ，未发生一　例ＤＶＴ，提示我国的ＭＭ患者应用沙利度胺＋联合化疗发生　异有统计学意Ｘ（Ｐ＜Ｏ．０１），抑制率为（４４．６２５±５．６３０）％；鲨鱼软　骨低分子蛋白＋环磷酰胺组抑制率明显高于环磷酰胺组，差异　有统计学意义（尸＜Ｏ．０５）。结论新药。　ＤＶＴ的风险远低于欧美国家，这可能与人种遗传差异有关。患　者出现的主要不良反应是指端麻木感、便秘、嗜睡、水肿，程度　较轻，患者均可以耐受。以患者指端麻木感发生率较高，考虑与　同时应用长春新碱有关。　总之，沙利度胺加联合化疗治疗ＭＭ疗效明显，患者无明　显不良反应增加，耐受性好。采用此方案，我国患者与西方患者　相比深静脉栓塞发生的概率极低。　参考文献　１　Ｓｉｎｇｈａｉ　Ｓ，Ｍｅｈｔａ　Ｊ，Ｄｅｓｉｋａｎ　Ｒ，ｅｔ　１．Ａｎｆａｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ　ｉｎ　鲨鱼软骨低分子蛋白可抑制实　体瘤的生长，有望成为治疗恶性肿瘤及其他血管增生性疾病的　【关键词】鲨鱼软骨低分子蛋白　抑制　肿瘤　我们【ｌ、２１采用通过鲨鱼软骨（ｓｈａｒｋ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ，ＳＣ）粉碎后，反　复冻融超滤截取分子量在１０～１００　ｋＤａ的鲨鱼软骨低分子蛋　白，呈浅黄色粉末状，水溶性较好，它不仅可以抑制内皮细胞生　长、黏附、迁移，还抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的形成，且避　ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］．Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ，１９９９，３４（２１）：１５６５－１５７１　２　Ｗｅｂｅｒ　Ｄ，Ｒａｎｋｉｎ　Ｋ，Ｇａｖｉｎｏ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ　ａｌｏｎｇ　ｏｒ　ｗｉｔｈ　ｄｅｘａｍ—　免了接触盐酸胍、丙酮等有害物质，具有提取方法简单、造价低　廉等利于大规模生产的优点。本研究通过观察鲨鱼软骨低分子　蛋白对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响，了解它对实体瘤的作用，为　ｅｔｈａｓｏｎ，Ｆ　ｆｏｒ　ｐｒｅｖｉｏｕｓ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｙｅｌｏｍａ　ｆＪ１．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｏｌ，　２００３，２１（１）：１６～１９　３　Ｚｅｒｖａｓ　Ｋ，Ｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ　ＭＡ，Ｈａｔｚｉｃｈａｒｉｓｓｉ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｉｍａｒｙ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　鲨鱼软骨低分子蛋白成为恶性肿瘤治疗中的靶向药物提供基　础。　１　材料　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｙｅｌｏｍａ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ｖｉｎｅｒｉｓｆｉｎｅ，ｌｉｐｏｓｏｍａｌ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　ａｎｄ　ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（Ｔ－ＶＡＤｄｏｘｉｌ）：ａ　ｐｈａｓｅ　ＩＩ　ｍｕｈｉｅｅｎｔｅｒ　ｓｔｕｄｙ册．Ａｍ　Ｏｎｃｏｌ，２００４，１５（１）：１３４～１３８　４　Ｓｃｈｕｔｔ　Ｐ，Ｅｂｅｌｉｎｇ　Ｐ，Ｂｕｔｔｋｅｒｅｉｔ　Ｕ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　１．１试剂鲨鱼软骨低分子蛋白，本研究组从鲨鱼软骨　中获得，分子量为１０～１００　ｋＤａ；胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司）；ＤＭＥＭ　（Ｇｉｂｃｏ公司）；胰蛋白酶（ＤＩＦＣＯ公司）；环磷酰胺（ＣＴｘ）（上海　基层医学论坛２００８年第１２卷ｌ２月上旬刊　ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ，ｅｐｉｒｕｂｉｅｉｎ　ｎｄ　ａｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＶＥＤ）ｆｏｒ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ｌＯ７０　■险国　华联制药有限公司）；其余试剂为国产分析纯。　１．２小鼠及其分组情况Ｃ５７ＢＬ／６健康、雄性小鼠４０只，　１０　ｍｇＣｍｌ鲨鱼软骨低分子蛋白生理盐水干预；④鲨鱼软骨低分　子蛋白＋环磷酰胺组，用含１０　ｍｇ／ｎ￣鲨鱼软骨低分子蛋白和　１０　ｍｇ／ｍｌ环磷酰胺的生理盐水干预。　２．３对移植性小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的疗效观察解剖并完整　地分离出皮下瘤块，称瘤体质量，按下列公式计算肿瘤抑制率。　肿瘤抑制率（％）＝（对照组平均瘤重一给药组平均瘤重）／对照　组平均瘤重×１００％。　２．４统计学方法取对数生长的　本文采用ＳＰＳＳ１０．０统计学软件进行统　６周龄，体重（２０±２）ｇ中国科学院上海医药工业研究院提供，　合格证号：沪动合证字第１０７号。　查随机数字表，将Ｃ５７ＢＬ／６小鼠４０只，随机分为４组：①　生理盐水对照组；②环磷酰胺对照组；③鲨鱼软骨低分子蛋白　组；④鲨鱼软骨低分子蛋白＋环磷酰胺组。　２方法　２．１移植性小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌模型的建立计分析数据，计量资料用均数±标准差表示，自身比较及组间　比较均用ｔ检验。　３结果　小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞，调整细胞密度为２　ｘ　１０’个细胞／ｍｌ，接种　于小鼠右腋皮下０．１　ｍＹ只，保留生长旺盛的荷Ｌｅｗｉｓ肺癌肿瘤　小鼠。取生长旺盛的荷Ｌｅｗｉｓ肺癌肿瘤小鼠瘤组织，无菌匀浆　离心后，用培养液调整肿瘤细胞密度为２×１０７个细胞／ｍｌ，将　其接种于小鼠右腋皮下每只０．１　ｍｌ。　鲨鱼软骨低分子蛋白与生理盐水组相比差异有统计学意　义（Ｐ＜０．０１），肿瘤抑制率为（４４．６２５±５．６３０）％；鲨鱼软骨低分子　蛋白＋环磷酰胺组的肿瘤抑制率明显高于环磷酰胺组，差异有　统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结果提示，鲨鱼软骨低分子蛋白有抑制　２．２药物干预接种后第２天腹腔注射给药，按小鼠体　重０．１　ｍ￣１０ｇ计算每只用药量，每天给药１次，连续１０　ｄ。①生　理盐水对照组，用生理盐水干预；②环磷酰胺对照组，用含环磷　酰胺１０ｍｇ／￣ｌ生理盐水干预；③鲨鱼软骨低分子蛋白组，用含　荷Ｌｅｗｉｓ肺癌肿瘤小鼠瘤体生长的作用，虽然其肿瘤抑制率不　及化疗药物环磷酰胺，但对化疗药物有增强疗效的协同作用。　见表１。　表１　ＳＣ低分子蛋白对荷Ｌｅｗｉｓ肺癌肿瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用（；　）　２组与３组比较（ｔ＝１７．９７７９，Ｐ＝－Ｏ．００００），３组与１组比较（ｔ＝１６．３２５３，Ｐ＝－０．００００），４组与２组比较（　９．５９７９，　Ｐ＝０．０１４２）。　４讨论　ｒｉｎｇ　ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ｄｒｕｇ，ｉｎ　ｐｈａｓｅⅢｃｌｉｎｉｃａｌ　ｔｉｒｌｓ【ａＪ】．　从海洋生物中寻找高效、低毒的抗肿瘤药物是近年天然药　物研究的热点，近年来，许多学者和研究人员把目光转移至鲨　鱼软骨血管抑制因子，包括ａｎｔｉ—ＭＭＰｓ［ａ】、ａｎｔｉ—ＶＥＧＦｔ４］、细胞凋亡　因子［５１、ｔＰＡ激活因子悯等等，通过拮抗内皮细胞生长因子、下调　Ｓｅｍｉｎ　Ｏｎｃｏ１．２００１，２８（６）：６２Ｏ一６２５　４　Ｂ　６　ｌｉｖｅａｕ　Ｒ，ｇｉｎｇｒａｓ　Ｄ，Ｋｒｕｇｅｒ　ＥＡ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｅ　ａｇｅｎｔ　Ｎｅｏ—　ｖａｓｔａ，ｔ（ＡＥ一９４１）ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００２，８（４）：１２４２－１２５０　５　Ｂｏｉｖｉｎ　Ｄ，Ｇｅｎｄｒｏｎ　Ｓ，Ｂｅａｎｌｉｅｕ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｅ　ａｇｅｎｔ　Ｎｅｏｖａｓａｔ　内皮细胞生长因子受体、下调内皮细胞表面黏附分子和促进内　皮细胞凋亡等综合作用可抑制新生血管的形成。Ｂｏｉｖｉｎ等ｍ研　究发现，８５　ｇ／ｌｌｌ１的鲨鱼软骨粗提物可引起内皮细胞ＤＮＡ断　（ＡＥ－９４１）ｉｎｄｕｃｅｓ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ　ａｃｅｌｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ，２００２，１　（１０）：７９５～８０２　６　Ｇｉｎｇｒａｓ　Ｄ，Ｌａｂｅｌｌｅ　Ｄ，Ｎｙａｌｅｎｄｏ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｎｇａｉｏｇｅｎｉｃ　ａｇｅｎｔ　Ｎｅｏ—　裂和细胞凋亡，进而达到抑制血管形成的功效。本研究组提取　的ｓｃ低分子蛋白已证实ｆｌ、２１可以抑制血管内皮细胞生长、黏附　和迁移运动，抑制新生血管的形成。本实验又进一步证实鲨鱼　软骨低分子蛋白能抑制实体瘤生长，与化疗药物环磷酰胺联合　ｖａｓａｔ（ＡＥ一９４１）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ　ｔｉｓｓｕｅ　ｐｌａｓｍｉｎａｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇ，２００４，２２（１）：１７－２６　作者简介：尚俊英，女，３２岁，硕士，毕业于广西医科大学，医师。Ｅ—　使用有协同作用，有望成为恶性肿瘤化学治疗的靶向新药，并　在其他血管增生Ｉ陛疾病中也会有广阔的应用前景。　参考文献　ｍａｉｌ：ｓｊｙ２８５６３９＠１６３．ｃｏｒｎ　（收稿日期：２００８—０８—１０）　１尚俊英，谢裕安，杨帆，等．鲨鱼软骨低分子蛋白的提取及其抑制新　生血管形成的初步研究［Ｊ】．广西医学，２００８，３０（２）：１５６～１５８　２尚俊英，谢裕安．鲨鱼软骨低分子蛋白对新生血管形成的影响［Ｊ】．基　层医学论坛，２００８，１２（２）：１５７—１５９　３　Ｆａｌａｒｄｅａｕ　Ｐ．Ｃｈａｍｏａｚｎｅ　Ｐ．Ｐｏｖｅｔ　Ｐ．ｅｔ　ａ１．Ｎｅｏｖａｓｔａｔ，ａ　ｎａｔｕｒａｌｌｙ　ｏｃｃｕｒ－－　基层医学论坛２００８年第ｌ２卷１２月上旬刊　ｌＯ７１