蒲公英生物碱提取工艺的研究

研究园地ｌ学界　蒲公英生物碱提取工艺的研究　口黄景怡钟振声　摘要：对蒲公英生物碱的提取工艺进行优化。溶剂提取法的最佳条件为：乙醇浓度：８０％，料液￣（ｍ／ｖ）：１：１２，提　取２次，提取时间／次：２．５ｈ，提取温度：５０℃。在该条件下，蒲公英生物碱的提取率为Ｏ．０６３％。超声波提取法的最　佳条件为：超声波频率：６０Ｈｚ，提取时间／次：３５ｍｉｎ，提取２次，料液比（ｍ／ｖ）：１：９，提取温度：５Ｏ℃，乙醇浓度：　７０％，在该条件下蒲公英生物碱提取率为０．３８０％，比溶剂提取法的提取率至少提高了５０３％。　关键词：蒲公英：生物碱；提取工艺；超声波提取　蒲公英是菊科多年生草本植物，始载于《唐本草》，别名蒲公　草、黄花地丁、黄花三七、婆婆丁。药理试验证明，蒲公英具有清　热解毒、消肿散结、利尿通淋等功效；作为一种药食同源的天然　绿色植物，在我国资源丰富，在临床上用于多种疾病的治疗，新　的药效又不断被发现，尤其是其广谱抗菌、抗炎、抗氧化等作用，　越来越受人们的重视。蒲公英含有多种有效成分，目前研究最多　的有黄酮类、酚酸类、吞豆素类、三萜类、植物甾醇类等，对于含　量较少且具有重要生理、抑菌活性的生物碱提取研究则鲜见报　道。本文对蒲公英生物碱的溶剂提取法和超声波提取法工艺的　各影响因素进行了研究，并确定了最佳提取工艺。　１实验材料与仪器　１．１试剂与药材　精密ｐＨ试纸，无水乙醇、９５％乙醇、浓硫酸、氢氧化钠、碘　化铋钾、石油醚、乙酸乙酯、浓氨水等试剂均为分析纯。氧化铝　片，进口。蒲公英：山西产，购于广州五山仁仁堂药店。　１．２仪器设备　电子分析天平：北京赛多利斯天平有限公司；恒温水浴锅：　上海亚荣生化仪器厂；电热鼓风干燥箱：上海福玛实验设备有限　公司：循环水式真空泵：河南巩义市英峪豫华仪器厂：超声波细　胞破碎仪：成都比朗实验设备有限公司。　２实验方法　２．１蒲公英生物碱的提取流程　蒲公英全草一蒲公英粗粉一提取一减压蒸馏一２％硫酸溶　解一过滤一５％氢氧化钠调ｐＨ值一氯仿萃取一蒸干称重一生　物碱。　２．２薄层层析法定性检测生物碱　样品浓缩后作为点样液，在层析氧化铝片上点样，以石油醚　乙酸乙酯一浓氨水（ｖ／ｖ／ｖ＝５：１：０．５）为展开剂，在展开剂前沿　距薄板顶部１　ｃｍ时停止展开，待溶剂挥尽后，喷洒显色剂碘化　铋钾试剂，出现一个橘红色斑点，证明了蒲公英生物碱的存在，　以及该提取工艺是能有效提取蒲公英生物碱的。　２．３提取率的计算　取蒲公英粗粉２５　ｇ左右，按提取流程来提取生物碱，计算　提取率。生物碱的提取率公式如下：　提取率／％＝蒲公英生物碱的质量÷蒲公英干粉的质量Ｘ　１００％　３实验结果　３．１溶剂提取法的单因素实验　生物碱大多数不溶或难溶于水而溶于乙醇、氯仿等有机溶　剂，生物碱盐类除了在乙醇中也能溶解外，其它溶解性能恰与生　物碱相反。因此，选用乙醇溶液作为提取溶剂。　除了选取提取溶剂作为考察因素外，还选取料液比、提取次　数、时间、温度等重要因素作为考察对象，各因素的考察范围如　表１，结果如图１～４所示。　表１溶剂提取法单因素实验各因素的考察范围列表　序　考察因素　号　乙醇浓度　料液比（Ⅱ　Ｘ提　提取时间／次　提取温度　（％）　取次数　（ｈ）　（℃）　５Ｏ、６５、８０、　１　ｌ：１０×２　１．Ｏ　５０　９５　９６＼瓣　ｇ罐　１：８、１：ｌ０、　１：１２、　Ｏ　Ｏ　Ｏ　２　８０　１．Ｏ　１：１４Ｘ２或者３　％　５０　∞　Ｏ．５、１．０、１．５、　３　８０　１：１Ｏ×２　５０　２．Ｏ、２．５、３．Ｏ　５Ｏ、６０、７０、　４　８０　１：ｌ０×２　２．５　８０　Ｏ　５Ｏ　６５　８Ｏ　９５　乙醇浓度／％　图１乙醇浓度对生物碱得率的影响　ｏ·ｏ　鬟０．０６　蒸ｏ．０５　蓊ｏ．０４　８　ｌＯ　１２　ｌ４　液料比／ｍ１·ｇ—ｌ　图２料液比与提取次数对生物碱提取率的影响　７５　广东科技２００９　６总第２１４期　Ｏ　学界Ｉ研究园地　％／僻甾营丰罐霉　Ｏ　Ｏ　Ｏ　Ｏ　∞　∞　０．５　１　１．５　２　２．５　３　时间／ｈ　图３提取时间对生物碱提取率的影响　０．０７　＼　譬００．０５　．０６　鏊　０．０４　划Ｏｏ３　４０　５０　６０　７０　８０　温度／＇Ｃ　图４提取温度对生物碱提取率的影响　根据图１～４可以知道，溶剂提取法单因素实验的蒲公英生　物碱的最佳提取条件为：乙醇浓度：８０％，料液比：１：１２，提取２　次，提取时间：２．５ｈ，提取温度：５Ｏ℃。在该条件下，蒲公英生物碱　的提取率为０．０６３％。　３．２蒲公英生物碱超声波提取方法的研究　根据正交设计的原理和使用原则，系统考察超声波功率Ｃ　（Ｈｚ）、提取时间与次数Ｄ（ｍｉｎ）、料液比Ｂ（ｇ·ｍｌ　）、提取温度Ａ　（℃）及乙醇浓度Ｅ（％）对蒲公英生物碱提取率的影响。实验结果　如表２和表３。　通过两个表的结果及Ｒ值综合评定可以看出，各因素对蒲　公英生物碱的提取率的影响：乙醇浓度＞提取温度＞料液比＞　提取时间＞超声波功率。结合表的极差分析，超声波提取实验的　最佳条件为Ａ　Ｂ　Ｃ　Ｄ　Ｅ。，即超声波频率：６０Ｈｚ，提取时间／次：　３５ｍｉｎ，提取２次，料液比：１：９，提取温度：５Ｏ℃，乙醇浓度：　７０％，试验号为６的提取条件与该最佳提取条件一致，蒲公英生　物碱提取率为０．３８０％。　对各因素进行方差分析，得到：ＦＡ＝５．１　１，ＦＢ＝５．０２，Ｆｃ＝４．５９，　ＦＤ＝４．８５，ＦＥ＝６．３３。查Ｆ分布的分位数表，得Ｆ００２５（３，１６）＝４．０８，　Ｆｏｏ￣（３，１　６）＝５．２９。因素Ｅ的置信水平ｐ＜０．０１，说明了乙醇浓度对　蒲公英生物碱提取率的影响具有非常显著的意义，其他因素的　表２超声波法提取生物碱的操作条件正交设计实验因素水平表　因素　水　提取温　料液　超声波　提取时间／次　乙醇浓　皿　度　比　功率　Ｘ次数　度　１　４０　１：７　６０　２Ｏ×２　３０　２　５０　１：９　９０　２５×２　５０　３　６０　ｌ：ｌ１　１２０　３０×２　７０　４　７０　１：１３　１５Ｏ　３５×２　９０　７６　广东科技２００９　６总第２１４期　表３实验方案与结果　生物碱提取　试验号　Ａ　Ｂ　Ｃ　Ｄ　Ｅ　率（％）　１　１　ｌ　１　１　１　０．０５８　２　１　２　２　２　２　Ｏ．１４２　３　ｌ　３　３　３　３　０．２１４　４　１　４　４　４　４　０．Ｏ６０　５　２　１　２　３　４　０．０９８　６　２　２　１　４　３　０．３８０　７　２　３　４　１　２　０．２２２　８　２　４　３　２　ｌ　０．０８２　９　３　１　３　４　２　Ｏ．１ｌ２　１０　３　２　４　３　１　Ｏ．１１２　ｌ１　３　３　ｌ　２　４　０．０８０　１２　３　４　２　１　３　Ｏ．２６６　１３　４　１　４　２　３　Ｏ．０７８　１４　４　２　３　１　４　０．０５８　ｌ５　４　３　２　４　１　０．１２２　ｌ６　４　４　ｌ　３　２　０．１５４　１　０．４＂／４　０Ｉ３４６　０．６７２　０．６０４　０．３７４　Ⅱ　０．７８２　０．６９２　０．６２８　０．３８２　０．６３０　１１１　０．５７０　０．６３８　０．４６６　０．５７８　０．９３８　Ⅳ　０．４１２　０．５６２　０Ｉ４５２　０．６７４　０．２９６　Ｒ＝Ｅｙ｛　１－３３１　１．３２２　１．２６７　１．２９９　１．５ｏ４　置信水平Ｐ均小于０．０２５，所以也具有显著意义。　４结论　超声波提取法比溶剂提取法更优：超声波提取法比溶剂提　取法的乙醇浓度低１０％ｏ，溶剂用量比溶剂提取法要少２５％，提　取总时间少５３％，在最优条件下，提取率至少提高了５０３％。■　参考文献：　【１】苏定冯．药理学进展【Ｍ】．北京：人民卫生出版社，２００３：３７．　ｆ２】姜宁，宋新波．蒲公英的药理研究进展【Ｊ】．中国中医药杂志，　２００８，６（１２）：１９—２３．　【３】吕海涛，邓锐，程伟等．蒲公英中有效成分的提取工艺考察【Ｊ】　ｌ中南药学，２００８，６（４）：３９１—３９４．　【４】梁春妹，严汝庆．附子生物碱提取影响因素的实验探讨【Ｊ】．中　国中药杂志，２００４，２９《３）：２２２—２２４．　【５】张德聪实验设计与数据评价【Ｍ】．广州：华南理工大学，２００４＇，　１９１　（作者单位：黄景怡，广东纺织职业技术学院；钟振声，华南　理工大学化学与化工学院）