调解书签字后是不能上诉、也不能再次起诉的。除非调解协议内容违法，或者调解违反自愿原则。可以申请再审，法院审查属实则引起再审程序的发生。调解书可以提出异议，如果调解书与当初的调解协议不一致，那么可以提起异议，法院审查后裁定补正。
法律依据：
《中华人民共和国民事诉讼法》
第九十六条 调解达成协议，必须双方自愿，不得强迫。调解协议的内容不得违反法律规定。
第九十七条 调解达成协议，人民法院应当制作调解书。调解书应当写明诉讼请求、案件的事实和调解结果。调解书由审 判人员、书记员署名，加盖人民法院印章，送达双方当事人。调解书经双方当事人签收后，即具有法律效力。